Dia 4

Olá,

Hoje terminamos esta investigação com a electroforese em gel de agarose.

- ELECTROFORESE EM GEL DE AGAROSE

A electroforese em gel, por acção de um campo eléctrico, é frequentemente utilizada para separar e estimar o tamanho de fragmentos de ácidos nucleicos, através da comparação da distância percorrida pelos fragmentos com a percorrida por fragmentos de peso molecular conhecido (padrões de peso molecular).

Assim, é possível estimar o peso molecular de cada fragmento da amostra a analisar.

A electroforese de DNA é normalmente realizada em gel de agarose.

A agarose funciona como uma rede porosa, facilitando a passagem das moléculas mais pequenas, que migram mais depressa do que as de maiores dimensões.

Quando sujeitos a um campo eléctrico, os ácidos nucleicos migram em direcção ao pólo positivo, uma vez que apresentam carga negativa a pH neutro.

A partir da electroforese obtém-se, então, os perfis de DNA.

No entanto, existem métodos mais rigorosos, como a electroforese capilar.

Preparação do gel de agarose (2%)

Máquina de electroforese

Resultados finais

1 2 3 4 5 6 7 8

1- Marcador

2- Controlo negativo

3- Sangue (Chelex)

4- Sangue (Fenol-clorofórmio)

5- Saliva - Marta (Chelex)

6- Saliva - Marta (Fenol-clorofórmio)

7- Saliva - Suspeito (Chelex)

8- Saliva - Suspeito (Fenol-clorofórmio)

Discussão dos resultados

Não houve contaminação, uma vez que no controlo negativo não existe nenhuma banda.

O 4 e o 8 não apresentam fragmentos amplificados, possivelmente devido ao DNA das amostras estar mais degradado.

No entanto, verificamos que o 6 apresenta fragmentos de DNA amplificados, possivelmente devido ao facto da amostra ser mais recente, logo menos degradada.

Assim sendo, o método de fenol-clorofórmio não é tão aconselhável para amostras mais degradadas.

Damos por terminado o nosso papel nesta investigação!