Olá,
Hoje terminamos esta investigação com a electroforese em gel de agarose.
- ELECTROFORESE EM GEL DE AGAROSE
A electroforese em gel, por acção de um campo eléctrico, é frequentemente utilizada para separar e estimar o tamanho de fragmentos de ácidos nucleicos, através da comparação da distância percorrida pelos fragmentos com a percorrida por fragmentos de peso molecular conhecido (padrões de peso molecular).
Assim, é possível estimar o peso molecular de cada fragmento da amostra a analisar.
A electroforese de DNA é normalmente realizada em gel de agarose.
A agarose funciona como uma rede porosa, facilitando a passagem das moléculas mais pequenas, que migram mais depressa do que as de maiores dimensões.
Quando sujeitos a um campo eléctrico, os ácidos nucleicos migram em direcção ao pólo positivo, uma vez que apresentam carga negativa a pH neutro.
A partir da electroforese obtém-se, então, os perfis de DNA.
No entanto, existem métodos mais rigorosos, como a electroforese capilar.
Preparação do gel de agarose (2%)
Máquina de electroforese
Resultados finais
1 2 3 4 5 6 7 8
1- Marcador
2- Controlo negativo
3- Sangue (Chelex)
4- Sangue (Fenol-clorofórmio)
5- Saliva - Marta (Chelex)
6- Saliva - Marta (Fenol-clorofórmio)
7- Saliva - Suspeito (Chelex)
8- Saliva - Suspeito (Fenol-clorofórmio)
Discussão dos resultados
Não houve contaminação, uma vez que no controlo negativo não existe nenhuma banda.
O 4 e o 8 não apresentam fragmentos amplificados, possivelmente devido ao DNA das amostras estar mais degradado.
No entanto, verificamos que o 6 apresenta fragmentos de DNA amplificados, possivelmente devido ao facto da amostra ser mais recente, logo menos degradada.
Assim sendo, o método de fenol-clorofórmio não é tão aconselhável para amostras mais degradadas.
Damos por terminado o nosso papel nesta investigação!
